96 परीक्षण कनैमाइसिन का पता लगाने के लिए ELISA परीक्षण किट उच्च पुनरुत्पादकता के लिए

कनैमाइसिन एलिसा टेस्ट किट

उत्पाद का वर्णन

रेगन^टीएमकनैमाइसिन एलिसा टेस्ट किट मांस/ यकृत/ गुर्दे, सेल लिसेट, मूत्र, सीरम और दूध में कनैमाइसिन के मात्रात्मक विश्लेषण के लिए एक प्रतिस्पर्धी एंजाइम इम्यूनोटेस्ट है।

किट की अनूठी विशेषताएं हैंः

• उच्च वसूली (> 80%), त्वरित (10-40 मिनट), और लागत प्रभावी निष्कर्षण विधियां।

• पता लगाने की सीमा 0.2 ng/g है।

• उच्च पुनरुत्पादकता।

• एक त्वरित एलिसा परीक्षण (नमूने की संख्या के बावजूद 1 घंटे से कम) ।

प्रक्रिया का अवलोकन

यह विधि एक प्रतिस्पर्धी रंगमितीय एलिसा परीक्षण पर आधारित है। कनमीसिन-बीएसए को प्लेट कुओं में लेपित किया गया है। विश्लेषण के दौरान,नमूना और कनैमाइसिन एंटीबॉडी (एंटीबॉडी #1) और एचआरपी-कंज्यूगेटेड एंटीबॉडी (एचआरपी-कंज्यूगेटेड एंटीबॉडी #2) इनक्यूबेशन के लिए कुओं में जोड़े जाते हैं।यदि नमूना में कनैमाइसिन अवशेष मौजूद है, तो यह कनैमाइसिन एंटीबॉडी के लिए प्लेट कुओं पर कनैमाइसिन के साथ प्रतिस्पर्धा करेगा, एक पेरोक्सीडेस एंजाइम के साथ चिह्नित माध्यमिक एंटीबॉडी,प्लेट कुओं पर लेपित दवा के लिए जटिल होने वाले प्राथमिक एंटीबॉडी को लक्षित करता हैएचआरपी सब्सट्रेट (टीएमबी) के जोड़ने के बाद प्राप्त रंग तीव्रता का नमूना में कनैमाइसिन अवशेष की एकाग्रता के साथ व्युत्क्रम संबंध है।

किट सामग्री, भंडारण और शेल्फ जीवन

रेगन^टीएमकनैमाइसिन एलिसा टेस्ट किट में 96 निर्धारण या दोहराने में 42 नमूनों के परीक्षण की क्षमता है (मानकों के लिए 12 कुओं को मानकर) ।किसी भी अप्रयुक्त माइक्रोवेल को पन्नी के बैग में वापस लाएं और मूल पैकेज में दिए गए ड्रेसर से फिर से सील करेंकिट को 2-8°C पर रखें.* जब किट को सही तरीके से संग्रहीत किया जाता है तो इसकी शेल्फ लाइफ 12 महीने की होती है।

यदि आप 1 महीने से अधिक समय तक किट का उपयोग करने की योजना नहीं बना रहे हैं, तो कनामाइसिन स्टैंडर्ड स्टॉक, कनामाइसिन एंटीबॉडी #1 और एचआरपी-संयुग्मित एंटीबॉडी #2 को -20°C पर या फ्रीजर में रखें।

संवेदनशीलता (खोज सीमा)

विशिष्टता (क्रॉस-रिएक्टिविटी)

आवश्यक सामग्री किट के साथ नहीं दी गई

• माइक्रोटाइटर प्लेट रीडर (450 एनएम)

• टिशू मिक्सर (जैसे Omni Tissue Master Homogenizer)

• वोर्टेक्स मिक्सर (उदाहरण के लिए वीडब्ल्यूआर से जीनी वोर्टेक्स मिक्सर)

• 10, 20, 100 और 1000 लीटर पाइपेट

• बहु-चैनल पाइपेट: 50-300 लीटर (वैकल्पिक)

चेतावनी और सावधानी

• मानकों में कानामाइसिन होता है।
• समाप्ति तिथि के बाद किट का उपयोग न करें।
• विभिन्न किटों या लोटों के अभिकर्मकों को मिश्रण न करें, सिवाय उन घटकों के जिनके पास उनकी समाप्ति तिथि के भीतर एक ही भाग संख्याएं हैं। एंटीबॉडी और प्लेट्स किट और लॉट-विशिष्ट हैं।
• प्रयोगशाला तापमान 20°25°C (68°77°F) बनाए रखने का प्रयास करें। हवा के नल के नीचे या उसके पास परीक्षण करने से बचें क्योंकि इससे अत्यधिक ठंडा, गर्म और/या वाष्पीकरण हो सकता है।प्रत्यक्ष सूर्य के प्रकाश में परीक्षण न करें, क्योंकि इससे अत्यधिक गर्मी और वाष्पीकरण हो सकता है।ठंडा बेंच टॉप से बचने के लिए इनक्यूबेशन के दौरान टेस्ट प्लेट के नीचे कागज के तौलिये या किसी अन्य इन्सुलेशन सामग्री की कई परतें रखनी चाहिए।.
• सुनिश्चित करें कि आप केवल आसुत या डी-आयनित पानी का उपयोग करें क्योंकि पानी की गुणवत्ता बहुत महत्वपूर्ण है।
• जब नमुने या अभिकर्मकों को एक खाली माइक्रोटिटर प्लेट में पाइपेट करते हैं, तो पाइपेट के सिरों को कुएं के निचले कोने में रखें, जिससे प्लास्टिक के संपर्क में आए।
• टेस्ट प्लेटों के इनक्यूबेशन का समय यथासंभव सटीक होना चाहिए। टेस्ट प्लेट में मानक जोड़ते समय सुसंगत रहें। पहले अपने मानक जोड़ें और फिर अपने नमूने।
• प्लेट में केवल निम्न से उच्च एकाग्रता तक के क्रम में मानक जोड़ें क्योंकि इससे मानक वक्र को कम करने का जोखिम कम हो जाएगा।
• स्थिरता बनाए रखने के लिए प्लेटों को हमेशा सील बैगों में सूखी सामग्री के साथ रेफ्रिजरेट करें।पैकेजिंग में रहते हुए प्लेटों पर कंडेनसेशन के गठन को रोकें और उन्हें कमरे के तापमान (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F) तक संतुलित करने दें।.

सुनिश्चित करें कि नमूनों को ठीक से संग्रहीत किया गया है। आम तौर पर, नमूनों को 2-4°C पर 1-2 दिनों से अधिक समय तक रेफ्रिजरेटर में नहीं रखा जाना चाहिए। यदि उन्हें अधिक समय तक संग्रहीत करने की आवश्यकता है तो नमूनों को कम से कम -20°C पर फ्रीज करें।प्रयुक्त होने से पहले जमे हुए नमूनों को कमरे के तापमान (20°C / 68°F) पर या रेफ्रिजरेटर में पिघलाया जा सकता है।.

• 1 × नमूना द्रव का तैयारीः10 × नमूना द्रव के 1 वॉल्यूम को 9 वॉल्यूम आसुत पानी के साथ मिलाएं।
• तैयार करना 1 ×नमूना एक्सट्रा बफर: 10 × नमूना विस्तार बफर के 1 वॉल्यूम को 9 वॉल्यूम आसुत पानी के साथ मिलाएं।

सेल लिसाट

• 100 लीटर सेल लाइसेट लें, 900 लीटर 1×प्रोब डिलेवेंट बफर जोड़ें, अच्छी तरह मिलाएं।

• 4000 x g पर 5 मिनट तक सेंट्रिफ्यूज करें।

• परीक्षण के लिए प्रत्येक कुएं पर 50 लीटर सुपरनाटेंट लें।

नोटः पतला करने का कारक: 10

झींगा/मछली/मांस/यकृत/किडनी

• समरूपित नमूना के 1.0 ग्राम के लिए, 1 × नमूना विस्तार बफर के 4.0 मिलीलीटर जोड़ें,

• एक मिनट के लिए चक्रीय मिश्रण के साथ नमूना को घुमाएं।

• 4000 x g पर 5 मिनट के लिए नमूना को सेंट्रिफ्यूज करें।

• ध्यान से एक नई ट्यूब में शीर्ष परत के 200uL स्थानांतरित,जोड़ना 1.375mL 1X नमूना पतला और 25uL नमूना संतुलन बफर, 30 सेकंड के लिए भंवर।

• परीक्षण के लिए प्रति कुएं 50uL का प्रयोग करें।

नोट: पतलापन कारक: 40.

मूत्र/सीरम

• मूत्र या सीरम के 50uL नमूने लें, 1x नमूना द्रव का 1.2 ml जोड़ें, अच्छी तरह मिलाएं।

• 4000 x g पर 5 मिनट तक सेंट्रिफ्यूज करें।

• परीक्षण के लिए प्रत्येक कुएं पर 50 यूएल सुपरनाटनट लें।

नोटः पतला करने का कारक: 25.

दूध

• एक केन्द्रापसारक ट्यूब में 100uL दूध के नमूने को जोड़ें, 900uL 1X नमूना पतला जोड़ें।
• 30 सेकंड के लिए जोरदार रूप से भंवर।
• 4000 x g पर 10 मिनट तक सेंट्रिफ्यूज करें।
• परीक्षण के लिए 50uL सुपरनाटेंट नमूने का प्रयोग करें।

नोटः पतला करने का कारक:10

कनमीसिन एलिसा टेस्ट किट प्रोटोकॉल

अभिकर्मक तैयारी

महत्वपूर्णः उपयोग से पहले सभी अभिकर्मकों को कमरे के तापमान तक लाया जाना चाहिए (1 2 घंटे में20 ₹ 25°C / 68 ¢ 77°F); कृपया ध्यान दें कि आप ¢ चेतावनी और सावधानियां ¢ अनुभाग पढ़ेंपृष्ठ3.ELISA परीक्षण से ठीक पहले समाधान तैयार किया जाना चाहिए। उपयोग से पहले सभी अभिकर्मकों को धीरे-धीरे उलटकर या घुमाकर मिलाया जाना चाहिए। चलने वाले कुओं की संख्या के लिए आवश्यक मात्रा तैयार करें।अभिकर्मकों को मूल स्टॉक ट्यूब/फ्लास्क में वापस न करेंअभिकर्मकों को संभालने के समय एक बार में इस्तेमाल किए जाने वाले जलाशयों का उपयोग करने से संदूषण का जोखिम कम हो सकता है और इसकी सिफारिश की जाती है।

• 1X वाश सॉल्यूशन की तैयारी

20X वाश सॉल्यूशन के 1 वॉल्यूम को 19 वॉल्यूम आसुत पानी में मिलाएं।

एलिसा परीक्षण प्रोटोकॉल

प्रयोग की जाने वाली अलग-अलग स्ट्रिप्स और एलीक्वाट अभिकर्मकों को निम्न उदाहरण के रूप में लेबल करें:

• प्रत्येक कनैमाइसिन स्टैंडर्ड के 50 लीटर को अलग-अलग कुओं में डुप्लीकेट में डालें (केवल निम्न से उच्च एकाग्रता के क्रम में प्लेट पर स्टैंडर्ड डालें) ।

• प्रत्येक नमूने के 50 लीटर को अलग-अलग नमूना कुओं में डुप्लीकेट में डालें।

• प्रत्येक कुएं में HRP-Conjugated Ab#2 के 50 IU और प्रत्येक कुएं में Kanamycin Antibody #1 के 50 IU जोड़ें। 30 सेकंड के लिए प्लेट को मैन्युअल रूप से धीरे-धीरे हिलाकर अच्छी तरह से मिलाएं।

• प्लेट को 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर (20°C / 68°F) इनक्यूबेट करें। (इनक्यूबेशन के दौरान सीधे सूर्य के प्रकाश और ठंडे बेंच टॉप से बचें। इनक्यूबेशन के दौरान माइक्रोटिटर प्लेट को ढंकना अनुशंसित है) ।

• प्लेट को 1X वाश सॉल्यूशन के 250 लीटर से 4 बार धोएं। अंतिम धोने के बाद प्लेट को उलट दें और पेपर तौलिए पर धीरे-धीरे प्लेट को सूखने के लिए टैप करें (प्लेट धोने के तुरंत बाद अगला चरण करें।कार्य चरणों के बीच प्लेट को हवा में सूखने न दें).

• टीएमबी सब्सट्रेट के 100 लीटर जोड़ें। सब्सट्रेट जोड़ने के तुरंत बाद प्रतिक्रिया का समय। इनक्यूबेट करते समय 30 सेकंड के लिए प्लेट को मैन्युअल रूप से धीरे-धीरे हिलाकर समाधान को मिलाएं।किसी भी संभावित संदूषण से बचने के लिए किसी भी सब्सट्रेट को मूल कंटेनर में वापस न रखें। किसी भी सब्सट्रेट समाधान में रंग दिखाना खराब होने का संकेत है और इसे फेंक दिया जाना चाहिए।इनक्यूबेशन के दौरान माइक्रोटिटर प्लेट को ढंकने की सिफारिश की जाती है).

• 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करने के बाद (20 ₹ 25°C / 68 ¢ 77°F), एंजाइम प्रतिक्रिया को रोकने के लिए स्टॉप बफर के 100 लीटर जोड़ें।

• 450 एनएम तरंग दैर्ध्य के साथ प्लेट रीडर पर स्टॉप बफर जोड़ने के बाद जितनी जल्दी हो सके प्लेट पढ़ें (पढ़ने से पहले,प्लेट के तल पर एक फिसलन मुक्त पोंछे का उपयोग करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि नमी या फिंगरप्रिंट रीडिंग में हस्तक्षेप न करें).

कनैमाइसिन सांद्रता की गणना

एक मानक वक्र का निर्माण प्रत्येक संदर्भ मानक से प्राप्त औसत सापेक्ष अवशोषण (%) को एक लघुगणकीय वक्र पर ng/mL में इसकी एकाग्रता के विरुद्ध ग्राफ करके किया जा सकता है।

सापेक्ष अवशोषण (%) =अवशोषण शून्य मानकया नमूना x 100

मानक वक्र से ng/mL में परीक्षण दवा की संबंधित एकाग्रता निर्धारित करने के लिए प्रत्येक नमूना के लिए औसत सापेक्ष अवशोषण मानों का प्रयोग करें।

निम्नलिखित चित्र एक विशिष्ट क्लोरामफेनिकॉल मानक वक्र है।