विशिष्टता: | 96 परीक्षण | नमूना: | मछली, झींगा, मांस, यकृत, गुर्दे |
---|---|---|---|
शेल्फ जीवन: | एक साल | कीवर्ड: | Kanamycin परीक्षण किट, Kanamycin एलिसा किट |
आवेदन: | मछली, झींगा, मांस, यकृत, गुर्दे का परीक्षण करें | संवेदनशीलता: | 0.2 एनजी / एमएल |
हाई लाइट: | दवा अवशेष परीक्षण किट,खाद्य सुरक्षा परीक्षण किट |
REAGEN™ कनमाइसिन एलिसा टेस्ट किट मांस / जिगर / गुर्दे, सेल लाइसेट, मूत्र, सीरम और दूध में Kanamycin के मात्रात्मक विश्लेषण के लिए एक प्रतिस्पर्धी एंजाइम इम्यूनो है।
उच्च वसूली (> 80%), तेजी से (10-40 मिनट), और लागत प्रभावी निष्कर्षण के तरीके।
डिटेक्शन लिमिट 0.2 एनजी / जी है।
उच्च प्रजनन क्षमता।
एक त्वरित एलिसा परख (नमूनों की संख्या की परवाह किए बिना 1 घंटे से भी कम)।
विधि एक प्रतिस्पर्धी वर्णमिति एलिसा परख पर आधारित है।कनमाइसिन-बीएसए को प्लेट कुओं में लेपित किया गया है।विश्लेषण के दौरान, ऊष्मायन के लिए कुओं में नमूना और कानामाइसिन एंटीबॉडी (एंटीबॉडी # 1) और एचआरपी-कंजुगेट (एचआरपी-संयुग्मित एंटीबॉडी # 2) जोड़े जाते हैं।यदि कनमाइसिन अवशेष नमूने में मौजूद है, तो यह कनामाइसिन एंटीबॉडी के लिए प्लेट कुओं पर कानामाइसिन के साथ प्रतिस्पर्धा करेगा, द्वितीयक एंटीबॉडी, जिसे पेरोक्सीडेज एंजाइम के साथ टैग किया जाता है, प्राथमिक एंटीबॉडी को लक्षित करता है जो प्लेट कुओं पर लेपित दवा के लिए जटिल होती है। ।एचआरपी सब्सट्रेट (टीएमबी) के अलावा परिणामी रंग की तीव्रता, नमूने में कनमाइसिन अवशेष एकाग्रता के साथ एक विपरीत संबंध है।
REAGEN™कनामाइसिन एलिसा टेस्ट किट में 96 निर्धारणों की क्षमता है या डुप्लिकेट में 42 नमूनों की जांच (मानकों के लिए 12 कुओं को संभालने)।फ़ॉइल बैग में किसी भी अप्रयुक्त माइक्रोबेल्स को वापस करें और मूल पैकेज में प्रदान किए गए डीकैस्केंट के साथ उन्हें फिर से खोलें।किट को 2-8 ° C * पर स्टोर करें।शेल्फ जीवन 12 महीने है जब किट ठीक से संग्रहीत होता है।
किट सामग्री | रकम | भंडारण |
कनमाइसिन-लेपित प्लेट | 1 एक्स 96-अच्छी तरह से प्लेट | 2-8 डिग्री सेल्सियस |
कनमाइसिन मानक नकारात्मक नियंत्रण (सफेद कैप ट्यूब) 0.2 एनजी / एमएल (पीला कैप ट्यूब) 0.6 एनजी / एमएल (नारंगी कैप ट्यूब) 1.8 एनजी / एमएल (गुलाबी टोपी ट्यूब) 5.4 एनजी / एमएल (बैंगनी टोपी ट्यूब) 16.2 एनजी / एमएल (ब्लू कैप ट्यूब) 1000 एनजी / एमएल (स्पाइकिंग, वैकल्पिक, लाल टोपी ट्यूब) |
1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL |
2-8 ℃
|
कनामाइसिन एब # 1 | 6.0mL | 2-8 ℃ |
एचआरपी-संयुग्मित एब # 2 | 6.0mL | |
10 × नमूना पतला | 15 एमएल | |
20 × धो समाधान | 28mL | |
बफ़र बंद करो | 12ml | |
टीएमबी सबस्ट्रेट | 12ml | |
10 × नमूना एक्सट।बफर (वैकल्पिक) | 15ml | |
नमूना संतुलन बफर | 2 एमएल |
यदि आप 1 महीने से अधिक समय तक किट का उपयोग करने की योजना नहीं बना रहे हैं, तो Kanamycin Standard Stock, Kanamycin Antibody # 1and HRP-Conjugated Antibody # 2 को -20 ° C या एक फ्रीजर में स्टोर करें।
नमूना प्रकार | पहचान सीमा (एनजी / जी या पीपीबी) |
मछली / झींगा / मांस / जिगर / गुर्दे | 8 |
सेल Lysate | 2 |
मूत्र / सीरम | 5 |
दूध | 2 |
analytes | क्रॉस-रिएक्टिविटी (%) |
केनामाइसिन | 100 |
स्ट्रेप्टोमाइसिन | <0.1 |
Dihydrostreptomycin | <0.1 |
neomycin | <0.1 |
माइक्रोटिटर प्लेट रीडर (450 एनएम)
ऊतक मिक्सर (उदाहरण के लिए ओमनी ऊतक मास्टर होमोजेनाइज़र)
भंवर मिक्सर (जैसे VWR से जिन्न भंवर मिक्सर)
10, 20, 100 और 1000 यूएल पिपेट
मल्टी-चैनल पिपेट: 50-300 यूएल (वैकल्पिक)
सुनिश्चित करें कि नमूने ठीक से संग्रहीत हैं।सामान्य तौर पर, नमूनों को 1-2 दिनों के लिए 2-4 डिग्री सेल्सियस पर प्रशीतित किया जाना चाहिए।कम से कम -20 डिग्री सेल्सियस के लिए नमूने फ्रीज अगर वे एक लंबी अवधि के लिए संग्रहीत करने की आवश्यकता है।जमे हुए नमूनों को कमरे के टेम्पों (20 - 25 ° C / 68 - 77 ° F) या उपयोग से पहले रेफ्रिजरेटर में पिघलाया जा सकता है।
100 लीटर सेल लीजेट लें, 900 × 1 × नमूना पतला बफर जोड़ें, अच्छी तरह मिलाएं।
4000 x g पर 5 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र।
परख के लिए प्रति अच्छी तरह से सतह पर तैरनेवाला के 50 यूएल ले लो।
ध्यान दें: प्रदूषण कारक: १०।
समरूप नमूने के 1.0 ग्राम के लिए, 1 × नमूना एक्सटी के 4.0mL जोड़ें।बफर,
भंवर मिक्सर के साथ 1 मिनट के लिए नमूना भंवर।
4,000 x g पर 5 मिनट के लिए नमूने को अपकेंद्रित्र करें।
सावधानीपूर्वक शीर्ष परत के 200uL को एक नई ट्यूब में स्थानांतरित करें, 1 जोड़ें।1X का 375mL नमूना पतला और नमूना शेष बफर के 25uL, 30 सेकंड के लिए भंवर।
परख के लिए प्रति कुएं 50uL का उपयोग करें।
ध्यान दें: प्रदूषण कारक: 40।
मूत्र या सीरम के नमूने का 50uL लें, 1X नमूना के 1.2 एमएल को मिलाएं, अच्छी तरह मिलाएं।
4,000 x g पर 5 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र।
परख के लिए प्रति अच्छी तरह से सतह पर तैरनेवाला के 50uL ले लो।
ध्यान दें: प्रदूषण कारक: 25।
ध्यान दें: प्रदूषण कारक: १०
महत्वपूर्ण: उपयोग करने से पहले सभी अभिकर्मकों को कमरे के तापमान तक लाया जाना चाहिए (1 - 2 घंटे पर 20 - 25°सी / 68 - 77°एफ);सुनिश्चित करें कि आपने "चेतावनी और सावधानियां" अनुभाग को पढ़ा है पृष्ठ 3। समाधान केवल एलिसा परीक्षण से पहले तैयार किया जाना चाहिए।सभी अभिकर्मकों को धीरे से inverting या उपयोग करने से पहले घूमता द्वारा मिश्रित किया जाना चाहिए।कुओं की संख्या के लिए आवश्यक वॉल्यूम तैयार करें।अभिकर्मकों को मूल स्टॉक ट्यूबों / बोतलों में वापस न करें।अभिकर्मकों को संभालते समय डिस्पोजेबल जलाशयों का उपयोग करना संदूषण के जोखिम को कम कर सकता है और इसकी सिफारिश की जाती है।
डिस्टिल्ड वॉटर के 19 वॉल्यूम के साथ 20X वॉश सॉल्यूशन का 1 वॉल्यूम मिलाएं।
निम्नलिखित के रूप में इस्तेमाल किया जाएगा कि अलग अलग स्ट्रिप्स लेबल और निम्नलिखित उदाहरण के रूप में अभिकर्मकों:
अंग | प्रतिक्रिया के अनुसार आयतन | 24 प्रतिक्रियाएँ |
कानामाइसिन एंटीबॉडी # 1 | 50ul | 1.2mL |
एचआरपी-संयुग्मित एब # 2 | 50ul | 1.2mL |
1 एक्स धो समाधान | 1.0 एम.एल. | 24mL |
बफ़र बंद करो | 100 यू एल | 2.4 एम.एल. |
टीएमबी सबस्ट्रेट | 100 यू एल | 2.4 एम.एल. |
प्रत्येक कनामाइसिन मानकों के 50 यूएल को अलग-अलग कुओं में डुप्लिकेट में जोड़ें (केवल कम एकाग्रता से उच्च एकाग्रता के क्रम में मानक जोड़ें)।
प्रत्येक नमूने के 50 यूएल को अलग-अलग नमूना कुओं में डुप्लिकेट में जोड़ें।
प्रत्येक कुएं में 50 uL मानव संसाधन विकास मंत्री-संयुग्मित Ab # 2 और प्रत्येक अच्छी तरह से Kanamycin एंटीबॉडी # 1 के 50 uL जोड़ें।30 के लिए मैन्युअल रूप से प्लेट को धीरे से हिलाकर अच्छी तरह मिलाएं।
कमरे के तापमान (20 - 25 डिग्री सेल्सियस / 68 - 77 डिग्री एफ) पर 30 मिनट के लिए प्लेट सेते हैं।(ऊष्मायन के दौरान सीधे धूप और ठंड बेंच से बचें।ऊष्मायन करते समय माइक्रोएटर प्लेट को कवर करने की सलाह दी जाती है)।
प्लेट को 4 बार धो लें 1X वाश समाधान के 250 यूएल।अंतिम धोने के बाद, प्लेट को पलटें और धीरे से प्लेट को कागज के तौलिये पर सुखाएं। प्लेट धोने के तुरंत बाद अगला चरण करें। काम के चरणों के बीच प्लेट को हवा में सूखने न दें)।
TMB सब्सट्रेट के 100 uL जोड़ें।सब्सट्रेट जोड़ने के तुरंत बाद प्रतिक्रिया का समय।धीरे से इनक्यूबेट करते हुए 30 के लिए प्लेट को धीरे से हिलाते हुए घोल को मिलाएं (किसी भी संभावित संदूषण से बचने के लिए किसी भी सब्सट्रेट को मूल कंटेनर में वापस न रखें।रंग को प्रदर्शित करने वाला कोई भी सब्सट्रेट समाधान खराब होने का संकेत है और इसे छोड़ दिया जाना चाहिए।ऊष्मायन करते समय माइक्रोएटर प्लेट को कवर करने की सलाह दी जाती है)।
कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए ऊष्मायन के बाद (20 - 25°सी / 68 - 77°एफ), एंजाइम प्रतिक्रिया को रोकने के लिए स्टॉप बफर के 100 यूएल जोड़ें।
450 एनएम तरंग दैर्ध्य के साथ एक प्लेट रीडर पर स्टॉप बफर के अतिरिक्त के बाद जितनी जल्दी हो सके प्लेट को पढ़ें (पढ़ने से पहले, प्लेट के नीचे एक लिंट-फ्री वाइप का उपयोग करें ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि कोई नमी या उंगलियों के निशान रीडिंग में हस्तक्षेप न करें)।
एक मानक वक्र एक लघुगणक वक्र पर एनजी / एमएल में इसकी एकाग्रता के खिलाफ प्रत्येक संदर्भ मानक से प्राप्त औसत सापेक्ष अवशोषण (%) की साजिश रचकर बनाया जा सकता है।
सापेक्ष अवशोषण (%) = अवशोषण शून्य मानकया नमूना x 100
मानक वक्र से एनजी / एमएल में परीक्षण दवा की इसी एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए प्रत्येक नमूने के लिए सापेक्षिक सांद्रता मान का उपयोग करें।
निम्नलिखित आंकड़ा एक विशिष्ट क्लोरैमफेनिकोल मानक वक्र है।